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怎樣才能選到合適的酶標(biāo)板
日期:2024-11-22 01:49
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摘要:怎樣才能選到合適的酶標(biāo)板高結(jié)合力:外表經(jīng)處理后,其蛋白結(jié)合才能大大增強(qiáng),可達(dá)300~400ngIgG/cm2,首要結(jié)合的蛋白分子量>10kD。
運(yùn)用該類酶標(biāo)板可進(jìn)步敏感性,并可相對削減包被蛋白的濃度和用量,不足之處為較易發(fā)作非特異性反響??乖蚩贵w包被后,以非離子去污劑無法有效地關(guān)閉未結(jié)合蛋白的部位,需運(yùn)用蛋白作為關(guān)閉劑。
怎樣才能選到合適的酶標(biāo)板
一:依據(jù)酶標(biāo)板與蛋白和其它分子結(jié)合才能的不同,分為高結(jié)合力、中結(jié)合力和氨基化 高結(jié)合力:外表經(jīng)處理后,其蛋白結(jié)合才能大大增強(qiáng),可達(dá)300~400ngIgG/cm2,首要結(jié)合的蛋白分子量>10kD。
運(yùn)用該類酶標(biāo)板可進(jìn)步敏感性,并可相對削減包被蛋白的濃度和用量,不足之處為較易發(fā)作非特異性反響。抗原或抗
體包被后,以非離子去污劑無法有效地關(guān)閉未結(jié)合蛋白的部位,需運(yùn)用蛋白作為關(guān)閉劑。 中結(jié)合力:經(jīng)外表疏水鍵被迫與蛋白結(jié)合,合適作為分子量>20kD的大分子蛋白的固相載體,其蛋白結(jié)合才能為
200~300ng IgG/cm2。該類板能夠慵懶蛋白或非離子去污劑作為關(guān)閉液。 氨基化:經(jīng)外表改性處理后具有帶正電荷的氨基,其疏水鍵由親水鍵取代。該類酶標(biāo)板合適作為小分子蛋白的固相
載體。運(yùn)用合適的緩沖液和pH值,其外表可經(jīng)過離子鍵與帶負(fù)電荷的小分子結(jié)合。由于其外表的親水特性和可經(jīng)過
其它交聯(lián)劑共價(jià)結(jié)合的才能,可用于固定溶于Triton-100、Tween 20等去污劑的蛋白分子。該類板的缺點(diǎn)為由于
降低了疏水性,一部分蛋白分子無法結(jié)合;此外,其外表需有效地關(guān)閉。由于親水和共價(jià)的外表特性,運(yùn)用的關(guān)閉液
必須能夠與非反響性氨基基團(tuán)和所挑選的交聯(lián)劑中任何功用基團(tuán)發(fā)作效果。
二:依據(jù)酶標(biāo)板底部的不同,能夠分為平底、U型底、V型底 平底的折射率低,適于在酶標(biāo)儀檢測;U型底的酶標(biāo)板折射率較高,便利加樣、吸樣、混勻等操作,能夠不用放在
酶標(biāo)儀上,直接經(jīng)過目測觀察色彩改變情況,然后斷定有無相應(yīng)的**反響。V底的酶標(biāo)板能夠準(zhǔn)確的汲取樣品。
三:依據(jù)色彩分為通明、黑色、白色 通明的是*常用的,用于*一般的酶聯(lián)**試驗(yàn)。相對于通明的的板子,還有用于發(fā)光檢測用的不通明的板子,一
般有黑色和白色兩種。黑色的酶標(biāo)板本身會有光吸收,所以它的信號相對于白色的板子要低許多,因而一般用于檢
測較強(qiáng)的光,如熒光檢測。而白色的酶標(biāo)板就用于較弱的光檢測,常用于一般的化學(xué)發(fā)光。別的黑色的酶標(biāo)板還能
夠消弱非特異反響帶來的問題。有些客戶會問,用一般的酶標(biāo)板可不能夠進(jìn)行發(fā)光檢測,回答是不能夠的,由于一般
從化學(xué)發(fā)光反響中發(fā)射出的光是各向同性的,也就是說各個(gè)方向上平等發(fā)射出來的。如果用通明的板子,光不只會從
垂直方向發(fā)散,還從水平方向發(fā)散出來。很容易的就會經(jīng)過各個(gè)孔之間的空隙和孔壁。這樣的話,光較強(qiáng)時(shí)相鄰孔之
間的影響就會很大,因而不能用通明的酶標(biāo)板來進(jìn)行化學(xué)發(fā)光試驗(yàn)。當(dāng)然,現(xiàn)在的酶標(biāo)板還有可拆開和不行拆開供客